Намена
Користи се за детекцију вируса мајмунских богиња у узорцима људског серума или ексудата лезија коришћењем ПЦР система у реалном времену.
Принцип теста
Овај производ је Такман® систем за ПЦР тест у реалном времену заснован на флуоресцентној сонди.Специфични прајмери и сонде су дизајнирани за детекцију Ф3Л гена вируса мајмунских богиња.Интерна контрола која циља на људски конзервирани ген прати прикупљање узорака, руковање узорцима и ПЦР процес у реалном времену како би се избегли лажно негативни резултати.Комплет је потпуно премикс лиофилизовани систем, који укључује материјале потребне за детекцију вируса мајмунских богиња: ензим за амплификацију нуклеинске киселине, ензим УДГ, реакциони пуфер, специфичан прајмер и сонду.
Компоненте | Пакет | Састојак |
Вирус мајмунских богињаЛиофилизовани премикс | 8 трака ПЦР епрувета× 6 кесица | Прајмери, сонде, дНТП/дУТП мешавина, Мг2+, Так ДНК полимераза, УДГ ензим |
МПВ Позитивна контрола | 400 μЛ×1 епрувета | ДНК секвенце које садрже циљни ген |
МПВ негативна контрола | 400 μЛ×1 епрувета | ДНК секвенце које садрже сегмент људског гена |
Раствор за растварање | 1 мЛ × 1 епрувета | Стабилизатор |
Сертификат о усаглашености | 1 комад | / |
1. Узоракколекција:Узорак треба сакупљати у стерилне епрувете у складу са тим
са стандардним техничким спецификацијама.
2. Припрема реагенса (област за припрему реагенса)
Извадите компоненте комплета, избалансирајте их на собној температури за употребу у стању приправности.
3. Обрада узорака (област обраде узорака)
3.1 Екстракција нуклеинске киселине
Препоручује се узимање 200μЛ течних узорака, позитивне контроле и негативне контроле за екстракцију нуклеинске киселине, у складу са одговарајућим захтевима и процедурама комплета за екстракцију вирусне ДНК.
3.2 Растварање лиофилизованог праха и додавање шаблона
Припремите лиофилизовани премикс вируса мајмунских богиња према броју узорака.За један узорак потребна је једна ПЦР епрувета која садржи лиофилизовани премикс прах.Негативну контролу и позитивну контролу треба третирати као два узорка.
(1) Додајте 15 μЛ раствора за растварање у сваку ПЦР епрувету која садржи лиофилизовани премикс, затим додајте 5 μЛ екстрахованих узорака/негативне контроле/позитивне контроле у сваку ПЦР епрувету.
(2) Чврсто покријте ПЦР епрувете, превуците ПЦР епрувете руком док се лиофилизовани прах потпуно не раствори и помеша, сакупите течност на дно ПЦР епрувета тренутним центрифугирањем при малој брзини.
(3) Ако користите уобичајени ПЦР инструмент у реалном времену за детекцију, онда директно пренесите ПЦР епрувете у област амплификације;ако користите БТК-8 за детекцију, онда треба да извршите следеће операције: пребаците 10 μЛ течности из ПЦР епрувете у реакциони чип бунар БТК-8.Једна ПЦР епрувета одговара једном отвору на чипу.Током операције пипетирања, уверите се да је пипета вертикална од 90 степени.Врхове пипете са аеросолном баријером треба поставити у центар бунара са умереном силом и престати гурати пипету када достигне прву брзину (да би се избегли мехурићи).Након што су бунари попуњени, извадите мембрану реакционог чипа да покријете све бунарчиће и чип се затим преноси у област за детекцију појачања.
4. ПЦР амплификација (област детекције)
4.1 Ставите ПЦР епрувете/реакциони чип у реакциони резервоар и поставите називе сваке реакционе јажице одговарајућим редоследом.
4.2 Поставке детекције флуоресценције: (1) вирус мајмунских богиња (ФАМ);(2) Унутрашња контрола (ЦИ5).
4.3 Покрените следећи бициклистички протокол
Протокол АБИ7500, Био-Рад ЦФКС96, СЛАН-96С, КуантСтудио:
Степс | Температура | време | Циклуси | |
1 | Пре-денатурација | 95℃ | 2 мин | 1 |
2 | Денатурација | 95℃ | 10 с | 45 |
Жарење, проширење, аквизиција флуоресценције | 60℃ | 30 с |
Протокол БТК-8:
Степс | Температура | време | Циклуси | |
1 | Пре-денатурација | 95℃ | 2 мин | 1 |
2 | Денатурација | 95℃ | 5 с | 45 |
Жарење, проширење, аквизиција флуоресценције | 60℃ | 14 с |
5. Анализа резултата (погледајте Упутство за употребу инструмента)
Након реакције, резултати ће се аутоматски сачувати.Кликните на „Анализирај“ да анализирате, а инструмент ће аутоматски интерпретирати Цт вредности сваког узорка у колони резултата.Негативни и позитивни резултати контроле морају бити у складу са следећим "6. Контрола квалитета".
6. Контрола квалитета
6.1 Негативна контрола: Нема Цт или Цт>40 у ФАМ каналу, Цт≤40 у ЦИ5 каналу са нормалном кривом појачања.
6.2 Позитивна контрола: Цт≤35 у ФАМ каналу са нормалном кривом појачања, Цт≤40 у ЦИ5 каналу са нормалном кривом појачања.
6.3 Резултат је валидан ако су испуњени сви горе наведени критеријуми.У супротном, резултат је неважећи.
Тумачење резултата
Могући су следећи резултати:
Цт вредност ФАМ канала | Цт вредност ЦИ5 канала | Интерпретација | |
1# | Нема Цт или Цт>40 | ≤40 | Негативан вирус мајмунских богиња |
2# | ≤40 | Било какви резултати | Позитиван на вирус мајмунских богиња |
3# | 40~45 | ≤40 | Ре-тест;ако је и даље 40~45, пријави као 1# |
4# | Нема Цт или Цт>40 | Нема Цт или Цт>40 | Неважећи |
БЕЛЕШКА: Ако се добије неважећи резултат, узорак треба поново да се прикупи и тестира.
Назив производа | Цат.Не | Величина | Специмен | Рок трајања | Транс.& Сто.Темп. |
ПЦР комплет за вирус мајмунских богиња у реалном времену | Б001П-01 | 48 тестова/комплет | Серум/ Ексудат лезије | 12 месеци | -25~-15℃ |